Fase móvil y fase estacionaria en la HPLC de fase reversa
Las columnas de fase reversa más usadas llevan cadenas de 18 u 8 carbonos (C18 o C8) sobre partículas de sílice. Un péptido se retiene por las zonas hidrofóbicas de su secuencia y sale cuando la fase móvil se vuelve lo bastante orgánica para desprenderlo 1.
La fase móvil: el gradiente y el TFA
La separación se hace con un gradiente: la proporción de acetonitrilo sube con el tiempo y cada péptido sale en su momento. El ácido trifluoroacético se añade a la fase móvil, y por eso los péptidos purificados por HPLC suelen quedar como sal de TFA 2.